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植入式無(wú)線(xiàn)光電刺激系統(tǒng)
來(lái)源: | 作者:康森特生物科技 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-05-31 | 1160 次瀏覽 | 分享到:

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光遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)的立體定向手術(shù)

小鼠用1-2%的異氟烷麻醉,并放置腦在立體定位儀(Kopf儀器)的加熱墊上(Harvard儀器)。去掉頭皮上的毛皮,用聚維酮碘清理傷口,并做一個(gè)正中切口。采用無(wú)菌手術(shù)技術(shù),給小鼠注射丁丙諾啡緩釋劑,用于術(shù)后恢復(fù)。讓小鼠在手術(shù)后至少兩周內(nèi)恢復(fù),然后進(jìn)行行為實(shí)驗(yàn)。

在顱內(nèi)光遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)中,病毒注射使用33號(hào)斜角針和10ul納米注射器(WPI 儀器),由注射泵(Harvard儀器)控制。以每分鐘150?nL的速度注射500納米升AAVdj-hSyn::iC++-eYFP 或 AAVdj-hSyn::eYFP (5×1011?vg?ml?1) ,并在取出前將注射器放置原位至少10?分鐘。使用以下坐標(biāo)(相對(duì)于Bregma):后島(?0.58(前后(AP)),±4.2(內(nèi)側(cè)(ML)),mPFC 3.85(背側(cè)-腹側(cè)(DV));mPFC(1.8(AP),±0.35(ML),?2.9(DV))。將光纖(0.39?NA,200?微米;胸腔)植入病毒注射坐標(biāo)上方200?微米處。使用Metabond(Parkell)將纖維固定在顱骨上。在進(jìn)行行為測(cè)試之前,小鼠至少恢復(fù)兩周。

無(wú)線(xiàn)刺激系統(tǒng)

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活體電生理學(xué)

心臟靶向ChRmine表達(dá)的小鼠被植入定制的頭板、參考電極和氰基丙烯酸酯粘合劑為基礎(chǔ)的“透明頭蓋帽”?;謴?fù)后,小鼠被限制飲水,并習(xí)慣于頭部固定,但在錄制會(huì)話(huà)之前允許它們喝水以解渴。在記錄前提前幾個(gè)小時(shí)用顱骨鉆進(jìn)行開(kāi)顱手術(shù),暴露的顱骨在記錄前、記錄中和記錄后用生理鹽水保持濕潤(rùn),直到用Kwik-Cast(WPI 儀器)快速密封。

在記錄之前,將小鼠置于起搏器背心中,在異氟烷短暫麻醉下,通過(guò)心電圖確認(rèn)穩(wěn)定的起搏。然后將老鼠頭部固定,讓它們恢復(fù)。然后將安裝在多探頭機(jī)械手系統(tǒng)(New Scale Technologies)上并由軟件控制的一個(gè)或兩個(gè)四桿Neuropixels2.0探針(用于同時(shí)進(jìn)行雙邊記錄)根據(jù)記錄的幾何形狀,以可變角度(0-20°)插入開(kāi)顱切口。探針的目標(biāo)是接觸腦島周?chē)念^骨,這可以從探頭彎曲或局部場(chǎng)電位的變化中推斷出來(lái),然后將探針回縮約100?微米,在記錄之前放置在原位至少15?分鐘。在小鼠接受5?秒光刺激(900 bpm (15?Hz),每次試驗(yàn)間隔至少為15~25?秒的情況下,沿著四條腿依次進(jìn)行記錄,記錄期間用胰蛋白酶清洗探針。

在記錄之后,對(duì)大腦進(jìn)行灌流、清理、成像,并登記到 Allen Brain Atlas中。利用親脂性染料CM-DiI或DiD(每次插入前覆蓋探針)的痕跡和電生理特征,確定所記錄的單個(gè)單元的圖譜坐標(biāo)。

將單個(gè)單位的峰值與起搏開(kāi)始對(duì)齊,減去5?S基線(xiàn)放電頻率、10?毫秒分頻和500?毫秒半高斯濾波,計(jì)算出可視化的周?chē)碳r(shí)間直方圖。

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光遺傳自由運(yùn)動(dòng)行為

采用473 nm激光從尖端測(cè)量到2-3?mW的恒定光對(duì)iC++進(jìn)行光遺傳抑制。使用刺激器控制激光快門(mén),接收行為儀器和控制軟件的同步輸入。


無(wú)線(xiàn)刺激系統(tǒng)由藍(lán)牙、主機(jī)、植入部分和充電模塊組成。用戶(hù)使用PC端軟件設(shè)置控制參數(shù),由主機(jī)將指令廣播給植入體,植入體接收后按照設(shè)定的參數(shù)運(yùn)行。Star系統(tǒng)完美的解決了信號(hào)傳輸穩(wěn)定性問(wèn)題,動(dòng)物在任意空間方位實(shí)驗(yàn)均能接收同等的刺激效果。Star系列目前包括Star R(無(wú)線(xiàn)光遺傳系統(tǒng))和Star E(無(wú)線(xiàn)電刺激系統(tǒng)),可適用于大小鼠、兔、狗、猴等多種動(dòng)物的中樞、外周神經(jīng)系統(tǒng)。Star還可與多種類(lèi)型設(shè)備配合使用,滿(mǎn)足多種實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景。


文章來(lái)源:

Hsueh, B., Chen, R., Jo, Y. et al. Cardiogenic control of affective behavioural state. Nature 615, 292–299 (2023). https://doi.org/10.1038/s41586-023-05748-8


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